May 19
Croissance des bactéries dans les solutions à base de une grande variété de sodium (NaCl) des concentrations vous donnera une bonne idée de la concentration optimale les organismes besoins de croissance. La concentration du soluté intérieur des cellules qui déterminent solution est isotonique. Taux de croissance maximale se produit à la solution la plus isotonique, avec un taux de croissance en baisse dans les deux solutions hypertoniques et hypotoniques.
• Choisissez une variété de concentrations de NaCl pour commencer: pas de sel, 0,5 molarité (M), 1,0, 1,5, 2,0. Faire un ensemble distinct de tubes de dilution à chaque concentration de NaCl. Vous aurez également besoin d'un ensemble distinct de plaques de Pétri de gélose nutritive à chaque concentration de NaCl.
• Mettre en place les tubes de dilution de 0,5 M de NaCl concentration. Verser 9 ml d'une solution de NaCl 0,5 M dans chacun des 5 tubes de dilution. Etiqueter les tubes 10 ^ 1, 10 ^ 2, tout le chemin à 10 ^ 5. Transfer 1 ml de la phase logarithmique de cellules de E. coli dans le tube 10 ^ 1. Vortex le mélange. Transférer 1 ml de la 10 ^ 1 au tube 10 ^ 2. Vortex le mélange. Continuez cette procédure sur le tube 10 ^ 5.
Répétez cette procédure à chaque concentration de NaCl.
• Plaque chaque ensemble de tubes sur des plaques de gélose nutritive à la concentration correcte. Déposer 1 ml de la 10 ^ 1, 0,5 M NaCl tube sur une plaque de Petri de gélose nutritive marqué "10 ^ 1, 0,5 M de NaCl). Jeter le tube. Verser 1 ml de la 10 ^ 2, 0,5 M de NaCl tube sur un nutriment plaque de gélose de Pétri marqué «10 ^ 2, 0,5 M de NaCl). Utilisez une spatule stérile pour diffuser échantillon uniformément sur les médias solidifié. Continuez cette procédure à 10 ^ 5.
Répéter à toutes les concentrations de NaCl.
• Prenez les plaques et les retourner (si les médias dans la plaque est orientée vers le haut). Selon l'Organisation mondiale de la santé (OMS), E. coli a une température optimale de croissance de 37 degrés Celsius. Incuber pendant 24 à 48 heures jusqu'à ce que l'observation de la croissance de la colonie.
• L'incubateur devrait rester stable 37 degrés Celsius tout au long de l'expérience, que la température variant pourrait affecter les résultats.
• Retirer les plaques de l'incubateur après 48 heures.
• Après plaques ont terminé l'incubation, organiser toutes les plaques de la concentration de NaCl. Trouver la dilution (10 ^ 10 ^ 1 à 5) qui contient 25 à 250 colonies par plaque. Ceci est le nombre optimal pour le dénombrement des bactéries sur une plaque.
• Compter les colonies et comparer entre les concentrations de NaCl. L'ensemble de plaques qui a le plus grand nombre de colonies est le plus proche de la concentration optimale de NaCl.
• Si vous désirez une estimation proche de la concentration de NaCl optimal pour la croissance, répéter l'expérience avec des concentrations en NaCl autour de celui que vous avez trouvé pour avoir la meilleure croissance (par exemple, si plus forte croissance a été trouvé à 0,5 M, choisir des concentrations de 0,3, 0,4 M , 0,5, 0,6 et 0,7 pour répéter l'expérience).